Resumo Objetivou-se estabelecer um protocolo para extração, cultivo e expansão de células tronco mesenquimais (CTM), utilizando-se 3,0 mL da medula óssea e 3,0 cm3 de tecido adiposo do subcutâneo de três cães machos com seis meses de idade. As amostras foram processadas e as células extraídas e cultivadas em DMEM. Para comprovação do isolamento de CTM, procedeu-se a caracterização fenotípica e a diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica. As células isoladas apresentaram morfologia alongada e fusiforme e capacidade de se diferenciar em osteoblastos, adipócitos e condrócitos. A caracterização fenotípica revelou alta expressão de marcadores de CTM CD90 (80,04%) e CD29 (96%) nas células de origem medular e CD90 (60,94%) e CD29 (77,08%) nas de origem adiposa. A expressão de marcadores hematopoiéticos foi baixa tanto nas células de origem medular CD45 (1,45%) e CD34 (1,53%), quanto nas de origem adiposa CD45 (1,45%) e CD34 (1,53%). As modificações e adaptações realizadas nos protocolos clássicos simplificaram o processo e foram eficientes, permitindo o isolamento e cultivo de CTM da medula óssea e do tecido adiposo de cães.

Abstract The objective of this study was to establish a protocol for the isolation and culture of mesenchymal stem cells (MSC) from bone marrow and adipose tissue of dogs. Three 6-month-old male dogs were used. Approximately 3.0 cm3 of adipose tissue and 3.0 mL of bone marrow were collected. The samples were processed and the isolated cells were cultured in DMEM. The cells were subjected to phenotypic characterization and to osteogenic, adipogenic, and condrogenic differentiation to confirm the isolation of the MSC. The cells showed elongated and fusiform morphology and they were able to differentiate into osteoblasts, adipocytes, and chondrocytes. Phenotypic characterization revealed high expression of the MSC markers CD90(80.04%) and CD29(96%) in the cells from bone marrow and high expression of CD90(60.94%) and CD29(77.08%) in the cells from adipose tissue. In addition, phenotypic characterization revealed low expression of hematopoietic markers CD45(1.45%) and CD34(1.53%) in the cells from bone marrow and low expression of CD45(1.45%) and CD34(1.53%) in the cells from adipose tissue. Based on these results, the modifications applied to classical protocols simplified the process and proved to be efficient in the isolation, culture, and expansion of MSC isolated from the bone marrow and adipose tissue of dogs.

RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito das células osteoprogenitoras derivadas de células tronco mesenquimais do tecido adiposo (CO-CTM-AD) no tratamento de defeitos ósseos críticos de cães. As células tronco mesenquimais do tecido adiposo (CTM-AD) foram submetidas à diferenciação osteogênica por 21 dias e usadas no tratamento de defeitos ósseos em rádios de cães. Foram constituídos três grupos experimentais: defeitos ósseos tratados com CO-CTM-AD (OC), defeitos preenchidos com osso autógeno (C+) e defeitos não preenchidos (C-). A regeneração óssea foi avaliada por meio de exames radiográficos, densitométricos e histomorfométricos. A área de neoformação óssea foi maior no grupo OC em relação ao grupo C- no 15o dia de pós-operatório. Os defeitos tratados com CO-CTM-AD mostraram maior neovascularização que os demais grupos aos 90 dias de avaliação. Conclui-se que o tratamento com CO-CTM-AD aumentou a área de osso neoformado no 15o dia de pós-operatório, mas não foi suficiente para que houvesse a completa união óssea em defeitos ósseos críticos no rádio de cães aos 90 dias.

ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate the effect of osteoprogenitor cells derived from mesenchymal stem cells from adipose tissue (OC-AD-MSCs), and differentiated into osteoblasts, in the treatment of critical bone defects in dogs. Adipose tissue derived mesenchymal stem cells (AD-MSCs) were subjected to osteogenic differentiation for 21 days and used in the treatment of bone defects in dogs radius. Either three experimental groups were bone defects treated with OC-AD-MSCs (OC), defects filled with autogenous bone (Control- C +), or empty defects (Control- C -). Bone regeneration was assessed by radiology, densitometry, and histomorphometry. The area of new bone formation was higher in the OC group compared to the control group (C-) on postoperative day 15. Defects treated with OC-AD-MSCs showed greater neovascularization than the other two groups at 90 days. We concluded that treatment with OC-AD-MSCs increased the area of new bone formation 15 days after surgery; however, it didn’t complete the bone union in critical bone defects in the radius of dogs at 90 days.

Feridas experimentais foram recobertas com substitutos temporários de pele produzidos com poliuretano, hidrocolóide, hemicelulose e vaselina e com gaze, para avaliação do cálculo da área e percentual de contração ao 7º, 14 e 28º dias de evolução. O curativo hidrocolóide proporcionou uma redução da área inicial ao sétimo dia, não se observando diferenças significativa entre os tratamentos nos períodos seguintes.

Experimentals wounds have covered with temporary skin substitutes, made of poliurethane, hidrocolloid, hemicellulose and vaseline and gauze in order to avaliate the area and contraction percentual at the 7th, 14th and 28th days. The hidrocolloidal dressing provided reduction of the initial area at the 7th day and no significant difference was observed on the other periods.

As características do líquido sinovial de ambas articulações fêmoro-tíbio-patelares de animais portadores de ruptura do ligamento cruzado cranial unilateral foram estudados em seis cães adultos. Os parâmetros macroscópicos observados foram cor, volume, viscosidade, turbidez, coagulação e teste de mucina. Os parâmetros microscópicos foram a contagem global e diferencial de células. Em dois animais, a viscosidade manteve-se normal e no restante apresentou-se diminuída. O resultado do teste de mucina foi normal em todos os animais e não ocorreu coagulação do fluido quando em contato com o ar. A contagem diferencial de células manteve-se dentro dos padrões normais, citados na literatura. Portanto, nos casos de ruptura do ligamento cruzado cranial, o líquido sinovial da articulação do joelho pode permanecer dentro dos padrões normais que o caracterizam, quanto aos aspectos macroscópicos. A composição celular global e relativa do líquido sinovial da articulação afetada apresenta respectivamente contagem superior e diferente a da articulação normal, embora dentro dos padrões fisiológicos citados na literatura.

The characteristics of the synovial fluid of both stifle joints from dogs with unilateral cranial cruciate ligament rupture were studied in six adult dogs. The macroscopic parameters observed were color, volume, viscosity, turbidity, and coagulation. In addition, mucin tests were performed. The microscopic parameters were global cell counting and differential cell counting. Two animals presented normal viscosity and in the others the viscosity was reduced. The result of the mucin test was normal in all animals and there was no coagulation of the fluid when in contact with the air. The differential cell counting was maintained within regular standards cited in the literature. Therefore, in the cases of cranial cruciate ligament rupture, the synovial fluid of the stifle joint can stay without any macroscopic change. Although the global and relative cell composition of the affected joint synovial fluid were kept within regular standards according to the literature, they were consistently higher than that of the normal joint.

Utilizando-se 20 cães, com o segmento lombar da coluna vertebral cirurgicamente desestabilizado na junção das vértebras L2-L3, foram estudadas a toxicidade e o aceite de placas ortopédicas de cloreto de polivinila (PVC) Tigre®, fixadas com parafusos nos corpos vertebrais e com fio ortopédico de aço inoxidável nos processos espinhosos. Apesar de que durante os 45 dias do estudo, verificaram-se resultados favoráveis quanto ao estado clínico-neurológico e resultados dos exames laboratoriais, e que os estudos microscópicos do fígado, rim e linfonodo poptileo não ofereceram indícios conclusivos de toxicidade, o material mostrou não ser inócuo já que desencadeia: (l) reação inflamatória granulomatosa e alterações vasculares no tecido fibroso circunvizinho à placa; (2) hematopoiese esplénica e (3) lesões vertebrais como osteonecrose, osteoporose, osteopenia, osteopetrose e mielofïbrose. Apesar das alterações serem subclínicas, estes dados sugerem que mais pesquisas devem ser realizadas à procura de PVCs menos lesivos, antes de se fazer a indicação deste material em traumatologia vertebral.

The tissue reaction and toxicity ofpolyvinylchloride (PVC) orthopedic plates, jixed by screws Io lhe vertebral bodies and by cerdage vires to lhe spinous processes, were tested in twenty dogs with lhe lumbar spine destabitized ai L2-L3. During the 45 days of the study, the technique was considered effective based on clinical results. Microscópio studiesjromfragments of the tiver, kidney and popliteat lymph node, did not suggest PVC plates toxicity, buí it were observed: l) granulomatous inflammatory reaction and vascular alterations in íhefibrous lissues adjacent to theplate; 2) splenic hematopoiesis and 3) vertebral osteonecrosis, osteoporosis, osteopetrosis, osteopenia and myelofibrosis. Although these alterations were found subclinics, more research should be done in order to found harmiess PVC, before introducing this material in spinal traumatology.

Utilizando-se 20 cães, com o segmento lombar da coluna vertebral cirurgicamente desestabilizado na junção das vértebras L2-L3, foi testada a eficiência de placas ortopédicas de cloreto de polivinila (PVC) Tigre®, fixadas com parafusos nos corpos vertebrais e com fio ortopédico de aço inoxidável nos processos espinhosos. As placas foram manual e individualmente confeccionadas para cada animal e esterilizadas pelo calor. Apesar de apresentar maleabilidade adequada, a resistência das placas utilizadas no corpos vertebrais deixou a desejar, dado seu rompimento em 40% dos casos. Apesar disto, durante os 45 dias do estudo, verificaram-se resultados favoráveis quanto ao estado clinico-neurológico, resultados de exames laboratoriais, achados radiológicos, estabilidade e alinhamento da coluna vertebral, assim como, quanto a resistência e flexibilidade das placas utilizadas nos processos espinhosos. Os fios ortopédicos de aço inoxidável, utilizados para fixar as placas no compartimento dorsal da coluna vertebral, passaram entre e não através desses processos.

The efficiency ofpolyvinylchioride (PVC) orthopedic plates, fixed by screws to the vertebral bodies and by cerciage wires to the spinous processes, were tested in twenty dogs with the lumbar spine destabilized at L2-L3. The plates were produced manually and individuatly for each animal and sterilized by heat. The plates exhibited suitable malleabitity but inappropriate strength because 40% ofthose affixed to the vertebral bodies were bmken. Nevertheless, during the 45 days ofthe study, the technique was consideredefective based on stability, clinicai, neurological, laboratory and radiological results. This effïciency was achieved by the technique used m the spinous processes, where the plates were fixed by wires passing between (not through) them.